Résumé:
Le projet HET-FLOW a pour objectif de développer des outils de biologie cellulaire à haute résolution faisant intervenir la cytométrie en flux afin de détecter simultanément, dans une même cellule, des transcrits et des protéines, et éventuellement d’autres caractéristiques fonctionnelles telles que le potentiel de membrane.
Nous utiliserons le modèle Lactococcus cremoris, une bactérie fermentaire possédant néanmoins des éléments de chaîne respiratoire, dont un, le cytochrome bd, présente une hétérogénéité de production d’une cellule à l’autre dans certaines conditions environnementales. Afin de déterminer si cette hétérogénéité protéique est liée à une hétérogénéité au niveau transcriptionnelle, nous transposerons la méthode de flow-FISH déjà établie pour les cellules eucaryotes au cellules bactériennes. Nous utiliserons également des marqueurs fluorescents du potentiel de membrane afin de déterminer si l’hétérogénéité de production de protéines se traduit par une hétérogénéité fonctionnelle, testant la capacité respiratoire des cellules. La finalité sera de corréler production de protéine, expression des gènes et fonctionnalité de la chaine respiratoire au niveau de la cellule unique.
Une fois mis au point sur la question relative à notre modèle, les outils développés seront destinés à être mis à disposition de la communauté des microbiologistes afin notamment de permettre l’étude de la variabilité phénotypique et des stratégies d’adaptation bactérienne.